高分辨率熔解曲線(high-resolution melting，HRM)是一種基于單核苷酸熔解溫度不同而形成不同形態(tài)熔解曲線的基因分析新技術，具有*的敏感性，可以檢測出單個堿基的差異。

作為一種穩(wěn)健的"post－PCR"技術，它不受突變堿基位置與類型的限制，無需序列特異性探針，在PCR結束后直接運行高分辨熔解即可完成對樣品的分析。HRM技術因操作簡便快捷、成本低廉、結果準確，并且實現了真正的閉管操作而受到普遍關注。

HRM原理： 

在PCR反應前將新型DNA飽和熒光染料加入反應體系，然后將PCR產物直接導入高分辨熔解分析儀中，在一定的溫度范圍內將PCR擴增產物進行加熱變性，儀器的光學檢測系統(tǒng)采集、分析熒光信號并繪制溫度熔解曲線，根據不同熔解曲線形狀來區(qū)分（單個）堿基差異。 

廣泛的 HRM 分析應用領域是基因篩查?；蚝Y查是搜索 PCR 擴增片段中是否存在未知變異，它可在測序步驟之前進行或者作為替代測序方法。由于 PCR 產物突變可導致 DNA 熔解曲線的形狀改變，因此它可以利用 HRM分析檢測。雜交雙鏈 DNA 樣本擴增并熔解時，其熔解曲線不同于純合野生型或突變樣本。如果操作得當，可以減少至少95%的測序工作量。隨著DNA染料和分析儀器的發(fā)展，HRM技術還將繼續(xù)完善和改進，在遺傳病分子診斷領域發(fā)揮更多的作用。 

HRM應用： 

作為專注于PCR領域超過24年的高品質試劑供應商，Solis BioDyne為您推薦，5X熱啟動EvaGreen高分辨率熔解曲線分析-預混Mix（PCR）： 

* 不含參比染料ROX，如需要含ROX，請選擇：08-33-00001

5X熱啟動EvaGreen高分辨率熔解曲線分析-預混Mix（PCR）提供如下組分：

*的性價比（進口品質，國產價格）： 

推薦的qPCR反應體系配置： 

* DNA模板濃度：cDNA 0.1 pg/μl -10 ng/μl ; gDNA 10 pg/μl – 4 ng/μl

推薦的qPCR反應程序： 

發(fā)表文章實驗結果展示：

【1】Negrisolo, Susanna et al. “Could the interaction between LMX1B and PAX2 influence the severity of renal symptoms?” European Journal of Human Genetics 26 (2018): 1708-1712.

使用Solis試劑盒，分析PAX2基因4號外顯子的錯義突變

【2】Gaczkowska, Agnieszka, et al. “Association of CDKAL1 Nucleotide Variants with the Risk of Non-Syndromic Cleft Lip with or without Cleft Palate.” Journal of Human Genetics, vol. 63, no. 4, 2018, pp. 397–406.

使用Solis試劑盒，分析CDKAL1基因SNP

HRM分析成功的關鍵： 

1.保持較短的擴增片段，實現高的靈敏度。與較大的擴增片段相比，100 bp 左右的擴增片段可簡化單核苷酸熔解曲線的檢測。

2.確保 PCR 擴增片段的特異性。錯配產物和引物二聚體可使數據解釋復雜化。引物濃度低于 200nM，MgCl2 在 1.5 mM至3 mM 范圍及使用熱啟動DNA 聚合酶將有助于獲得高特異性。

3.確保反應使用足夠的模板。一般而言，Ct 應低于30，以生成足夠的材料，實現準確的熔解分析。 

除了上述的穩(wěn)健的HRM分析預混Mix產品，Solis BioDyne為客戶提供終點PCR（end-point PCR），qPCR（real-time PCR），反轉錄PCR（Reverse transcription），以及其它PCR所需的配套試劑。產品線縱覽圖如下：

Solis BioDyne來源于歐盟-愛沙尼亞共和國，專注PCR領域超過24年，Solis BioDyne一直致力于開發(fā)和生產高品質的生命科學試劑，現已成為當今歐洲領xian的試劑供應商之一。高標準的生產標準和服務使Solis BioDyne成為值得信賴的首xuanPCR供應商。我們的DNA聚合酶，PCR Master Mixes，qPCR Mixes和其它試劑被110多個國家的研究者所使用，包括頂ji研究機構和生物技術公司。 

Solis BioDyne擁有獨jia的蛋白質穩(wěn)定技術專li，確保其PCR酶與PCR Mixes產品具有*的穩(wěn)定性，研究者可以常溫運輸以及常溫下配置PCR反應體系（無需冰盒）。即使是室溫放置30天，其酶活性也沒有損耗。 

作為Solis BioDyne在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的Solis BioDyne產品以及訂制服務。