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Agilent1260液相色譜的基本分離原理和脫氣方法

閱讀:3153      發(fā)布時間:2018-12-24
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Agilent1260液相色譜的基本分離原理
在色譜法中存在兩相,一相是固定不動的,我們把它叫做固定相;另一相則不斷流過固定相,我們把它叫做流動相。
色譜法的分離原理就是利用待分離的各種物質(zhì)在兩相中的分配系數(shù)、吸附能力等親和能力的不同來進行分離的。
使用外力使含有樣品的流動相(氣體、液體)通過一固定于柱中或平板上、與流動相互不相溶的固定相表面。當(dāng)流動相中攜帶的混合物流經(jīng)固定相時,混合物中的各組分與固定相發(fā)生相互作用。
由于混合物中各組分在性質(zhì)和結(jié)構(gòu)上的差異,與固定相之間產(chǎn)生的作用力的大小、強弱不同,隨著流動相的移動,混合物在兩相間經(jīng)過反復(fù)多次的分配平衡,使得各組分被固定相保留的時間不同,從而按一定次序由固定相中先后流出。與適當(dāng)?shù)闹髾z測方法結(jié)合,實現(xiàn)混合物中各組分的分離與檢測。
 
Agilent1260液相色譜脫氣方法
1.為什么要脫氣
流動相溶液往往因溶解有氧氣或混入了空氣而形成氣泡。氣泡進入檢測器后會在色譜圖上出現(xiàn)尖銳的噪音峰。小氣泡慢慢聚集后會變成大氣泡,大氣泡進入流路或色譜柱中會使流動相的流速變慢或出現(xiàn)流速不穩(wěn)定,致使基線起伏。氣泡一旦進入色譜柱,排出這些氣泡則很費時間。在熒光檢測中,溶解氧還會使熒光淬滅。溶解氣體還可能引起某些樣品的氧化或使溶液pH值發(fā)生變化。
 
2.脫氣方法
目前,Agilent1260液相色譜流動相脫氣使用較多的是離線超聲波振蕩脫氣、在線惰性氣體鼓泡吹掃脫氣和在線真空脫氣。
超聲波振蕩脫氣:將配制好的流動相連容器放入超聲水槽中脫氣10-20min。這種方法比較簡便,又基本上能滿足日常分析操作的要求,所以,目前仍廣泛采用。
惰性氣體鼓泡吹掃脫氣:將氣源(鋼瓶)中的氣體(氦氣)緩慢而均勻地通入儲液罐中的流動相中,氦氣分子將其它氣體分子置換和頂替出去,而它本身在溶劑中的溶解度又很小,微量氦氣所形成的小氣泡對檢測無影響。
 
真空脫氣裝置:將流動相通過一段由多孔性合成樹脂膜制造的輸液管,該輸液管外有真空容器,真空泵工作時,膜外側(cè)被減壓,分子量小的氧氣、氮氣、二氧化碳就會從膜內(nèi)進入膜外而被脫除。一般的真空脫氣裝置有多條流路,可同時對多個溶液進行脫氣。

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