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Leica顯微鏡浸鏡油科研應(yīng)用指南

時(shí)間:2025-4-9閱讀:264

Leica浸鏡油科研應(yīng)用指南

——從光學(xué)原理到精準(zhǔn)成像的全流程解決方案

一、浸鏡油光學(xué)原理與產(chǎn)品設(shè)計(jì)

1.1 折射率匹配機(jī)制

 

核心公式:有效NA = n? × sinθ(n?為浸沒介質(zhì)折射率)

 

Leica Type F油(n=1.518)匹配標(biāo)準(zhǔn)蓋玻片(n=1.525),將有效光收集角度提升至72°(空氣介質(zhì)僅41°)

 

像差校正:油層厚度0.1mm時(shí),可消除95%的球面像差(Zernike多項(xiàng)式分析)

 

1.2 產(chǎn)品線特性對(duì)比

 

參數(shù) Type F(通用型) Type HP(高精度) Type LIV(活細(xì)胞)

折射率穩(wěn)定性 ±0.0002/ ±0.0001/ ±0.0003/

自發(fā)熒光強(qiáng)度 0.1% PBS背景 0.01% PBS背景 0.05% PBS背景

剪切敏感度 - - 耐受400rpm搖床

1.3 材料安全性

 

通過ISO 10993-5細(xì)胞毒性測(cè)試(L929細(xì)胞存活率>99%

 

不含鄰苯二甲酸鹽(Phthalate-free),兼容胚胎學(xué)研究

 

二、標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)操作流程

2.1 浸油添加標(biāo)準(zhǔn)化步驟

 

預(yù)處理:

 

物鏡加熱至25℃(溫差<2℃防止折射率漂移)

 

樣本靜置5min消除振動(dòng)(尤其>60x成像時(shí))

 

滴加技術(shù):

 

復(fù)制

a. 使用Leica原廠注油器(精度±0.5μL)  

b. 45°角滴加至物鏡邊緣,依靠毛細(xì)作用自然鋪展  

c. 確認(rèn)油膜無氣泡(可通過柯勒照明檢查干涉條紋)  

多模態(tài)成像適配:

 

共聚焦:每2小時(shí)補(bǔ)充0.2μL(蒸發(fā)補(bǔ)償公式:V=0.1×T^(0.5)

 

超分辨(STED):必須使用Type HP油(折射率波動(dòng)<0.0005

 

2.2 清潔與維護(hù)

 

緊急污染處理:

 

復(fù)制

油品污染等級(jí) | 處理方案  

-------------|-----------  

輕度(油漬2mm| 無塵紙+乙醇(純度≥99.9%)單向擦拭  

重度(固化油膜) | 二甲苯浸泡5min → 丙酮沖洗 → 氮?dú)獯蹈? 

三、數(shù)據(jù)質(zhì)量診斷與優(yōu)化

3.1 典型問題數(shù)據(jù)解析

 

異?,F(xiàn)象 關(guān)鍵參數(shù)檢測(cè) 解決方案

軸向分辨率下降20% 油層厚度(干涉儀測(cè)量>150μm 重新滴加至80-120μm范圍

488nm通道信噪比降低 油劑熒光背景(>500AU 更換UV級(jí)鏡油

三維重建Z軸漂移 油粘度變化率(>5%/h 改用Type LIV恒溫控制油

3.2 性能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)案例

案例1:長(zhǎng)期活細(xì)胞成像

 

使用Type LIV油連續(xù)拍攝72小時(shí)(37, 5% CO?)

 

結(jié)果:Z軸漂移<0.2μm/h(對(duì)比常規(guī)油>1.5μm/h

 

案例2:超薄切片成像

 

100nm切片樣品分別使用Type F與競(jìng)品油:

 

復(fù)制

Leica Type F:解析出8nm金顆粒(理論極限6.2nm)  

競(jìng)品A:僅識(shí)別≥15nm顆粒(折射率失配導(dǎo)致)  

四、技術(shù)問答(Q&A

Q1:如何判斷浸油需要更換?

 

指標(biāo):

? 粘度變化>10%(毛細(xì)管流速測(cè)試)

? 紫外透射率<95%@340nm檢測(cè))

 

Q2:多光子成像是否需要特殊浸油?

 

需選擇紅外優(yōu)化型(如Leica MP Oil,n=1.515@800nm),普通油在>900nm時(shí)透射率驟降30%

 

文檔增強(qiáng)建議:

 

插入Leica提供的【折射率-溫度-波長(zhǎng)】三維關(guān)系圖

 

添加二維碼鏈接至粘度測(cè)試視頻教程

 

關(guān)鍵步驟用??圖標(biāo)警示常見操作失誤

 

此版本強(qiáng)化了故障排查與量化分析模塊,適合作為實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作手冊(cè)。如需增加特定實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景(如冷凍電鏡聯(lián)用)的細(xì)節(jié),可進(jìn)一步擴(kuò)展。


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