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elisa酶聯(lián)免疫試劑盒價(jià)格中的試劑-酶的底物

閱讀:188          發(fā)布時(shí)間:2018-2-5

elisa酶聯(lián)免疫試劑盒價(jià)格中的試劑-酶的底物 
酶的底物 
3.3.1 HRP的底物 
HRP催化過氧化物的氧化反應(yīng),代表性的過氧化物為H2O2,其反應(yīng)式如下:
DH2+ H2O2 D+ H2O
上式中,DH2為供氧體,H2O2為受氫體。在ELISA中,DH2一般為無色化合物,經(jīng)酶作用后成為有色的產(chǎn)物,以便作比色測(cè)定。常用的供氫體有鄰苯二胺(O-phenylenediamine, OPD)、四甲基聯(lián)苯胺(3,3\\',5,5\\'-tetramethylbenzidine, TMB)和ABTS[2,2\\'-azino-di-(3- ethylbenziazobine sulfonate-6)]。
OPD氧化后的產(chǎn)物呈橙紅色,用酸終止酶反應(yīng)后,在492nm處有zui高吸收峰,靈敏度高,比色方便,是HRP結(jié)合物zui常用的底物。OPD本身難溶于水,OPD•2HCL為水溶性。曾有報(bào)道OPD有致異變性,操作時(shí)應(yīng)予注意。OPD見光易變質(zhì),與過氧化氫混合成底物應(yīng)用液后更不穩(wěn)定,須現(xiàn)配置現(xiàn)用。在盒中,OPD和H2O2一般分成二組分,OPD可制成一定量的粉劑或片劑形式,片劑中含有發(fā)泡助溶劑,使用更為方便。過氧化氫則配入底物緩沖液中,有制成易保存的濃縮液,使用時(shí)用蒸餾水稀釋。先進(jìn)的ELISA盒中則直接配成含保護(hù)劑的工作濃度為0.02% H2O2的應(yīng)用液,只需加入OPD后即可作為底物應(yīng)用液。
TMB經(jīng)HRP作用后共產(chǎn)物顯藍(lán)色,目視對(duì)比鮮明。TMB性質(zhì)較穩(wěn)定,可配成溶液,只需與H2O2溶液混和即成應(yīng)用液,可直接作底物使用。另外,TMB又有無致癌性等優(yōu)點(diǎn),因此在ELISA中應(yīng)用日趨廣泛。酶反應(yīng)用HCL或H2SO4終止后,TMB產(chǎn)物由藍(lán)色呈黃色,可在比色計(jì)中定量,zui適吸收波長(zhǎng)為405nm。
ABTS雖不如OPD和TMB敏感,但空白值極低,也為一些盒所采用。
另一種HRP的底物為3-(4-羥基)苯丙酸[3-(4-hydroxy)phenly propionic acid,HPPA],經(jīng)HRP作用后,產(chǎn)物顯熒光,可用熒光光度計(jì)測(cè)量。用于elisa酶聯(lián)免疫試劑盒價(jià)格的優(yōu)點(diǎn)為可加寬定量測(cè)定的線性范圍。
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