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制備液相色譜中的流動相設計與調整
制備液相色譜中的流動相設計與調整是確保實驗成功和獲得準確數(shù)據(jù)的關鍵步驟。以下是對流動相設計與調整的詳細解釋，包括分點表示和歸納，以及參考文章中的相關數(shù)字和信息：
一、流動相配置注意事項
混合方式：
流動相的混合通常按照體積比（V/V）進行，因為溶液的體積隨溫度變化而變化，按重量比混合雖然重復性較好但操作繁瑣。
例如，配置50%乙腈水溶液時，可以直接量取乙腈500ml和水500ml，然后充分混合。
試劑要求：
高效液相色譜儀對試劑的純度有嚴格要求，如甲醇、乙腈等必須為色譜級純。
水應為超純水或購買質量有保證的純凈水。
二、流動相設計與調整原則
由強到弱：
一般先用極性強的90%的乙腈（或甲醇）/水（或緩沖溶液）進行試驗，根據(jù)出峰情況調整有機溶劑的比例。
三倍規(guī)則：
每減少10%的有機溶劑（甲醇或乙腈）的量，保留因子約增加3倍。這是一個省力且有效的調整方法。
粗調轉微調：
當分離達到一定程度時，應將有機溶劑10%的改變量調整為5%，并逐漸降低調整率，直至各組分的分離情況不再改變。
三、流動相pH值的調整
弱酸樣品：
流動相的pH值越小，組分的k值越大。當pH值遠低于弱酸的pKa值時，弱酸主要以分子形式存在。
分析弱酸樣品時，通常在流動相中加入少量的弱酸，如50mmol/L磷酸鹽緩沖液和1%醋酸溶液。
弱堿樣品：
對于弱堿樣品，情況相反。分析時通常在流動相中加入少量的弱堿，如50mmol/L磷酸鹽緩沖液和30mmol/L三乙胺溶液。
四、含緩沖鹽流動相的配制
配置緩沖鹽使用的鹽試劑也盡量使用色譜級純，稱樣要精準。
配置好后必須通過0.45μm或0.22μm濾膜過濾并超聲脫氣20min以上。
注意：緩沖鹽要臨用新配。
總結
流動相的設計與調整是液相色譜實驗中至關重要的一環(huán)。通過合理的混合方式、試劑選擇、pH值調整以及含緩沖鹽流動相的精確配制，可以確保實驗的高效性和準確性。同時，根據(jù)實驗需要，靈活運用由強到弱、三倍規(guī)則和粗調轉微調等原則，可以進一步優(yōu)化實驗條件，提高分離效果。