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使用說(shuō)明

1  細(xì)胞懸液混勻:按照實(shí)驗(yàn)要求的 濃度準(zhǔn)備細(xì)胞,在培養(yǎng)基瓶、培養(yǎng) 瓶或其他容器中混勻。建議的工作 容積為每層 30-50ml。

2 用移液管緊貼瓶壁緩慢地將液體加 到五層細(xì)胞培養(yǎng)瓶中,避免產(chǎn)生泡 沫或者氣泡(每次加液時(shí)移液管內(nèi) 液體可留少許)。 注意事 項(xiàng):10ml 移液管可以伸到 培養(yǎng)瓶        底部使培養(yǎng)基分散開,而 25 ml 移液管則只能伸到 NEST 標(biāo)志的地方把液體分散開。

3 把培養(yǎng)瓶有 NEST 標(biāo)志那一側(cè)朝 向自己,順時(shí)針傾斜 45 度左右放 置一段時(shí)間,使瓶中各個(gè)隔層的液 體達(dá)到平衡。  

4 輕緩地將培養(yǎng)瓶水平放置于工作臺(tái) 上,有耐思標(biāo)志那一面朝上。

5 前后左右輕輕晃動(dòng)多層瓶,液體會(huì) 均勻地分布在五個(gè)生長(zhǎng)面上。 注意事項(xiàng):搖晃的動(dòng)作要輕柔,一 方面是防止起泡沫,另一方面是要 防止培養(yǎng)基滲漏到下層中。

6 保持跟步驟 3 中一樣的姿勢(shì)將多層 瓶轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)箱,重復(fù)步驟 4 將多 層瓶放好。 

7 抽吸法: 1抽吸的時(shí)候,將多層瓶?jī)A斜 45 度,有 NEST 標(biāo)記的一面朝向自 己。2 將移液管伸到底部抽吸培 養(yǎng)基,直至*抽吸完。

8 傾倒法: 將有 NEST 標(biāo)志的一面朝向自己, 逆時(shí)針 45 度傾倒液體。 注意事項(xiàng):抽吸培養(yǎng)液時(shí)需使用 10 ml 或者 2 ml 移液管,才能將 培養(yǎng)液吸盡。 ??????????????????????????????細(xì)胞的收集:

9 用緩沖液清洗一遍以去除殘留的血清,后加入消化液(≥ 5ml/ 層),混勻。

10 消化大約 2 min(視細(xì)胞情況而定),用消化終止液中 和消化液。

11 采用移液管抽吸法或傾倒法將細(xì)胞懸液置于離心管等容 器中。

12 用一定量的緩沖液沖洗多層瓶三次,將沖洗液同時(shí)置于 離心管中,混勻計(jì)數(shù)或者傳代接種。