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2020-12-24 閱讀(7710)
MTT增殖曲線，基本上就是基礎(chǔ)的功能實(shí)驗(yàn)了，養(yǎng)過(guò)細(xì)胞的你應(yīng)該都會(huì)做。
但是，要怎么樣才能省時(shí)省力呢？你也知道，如果用MTT的話，加入10ul的MTT后要等四個(gè)小時(shí)，在活細(xì)胞的線粒體中形成甲囋，然后在把培養(yǎng)基吸掉，再加上DMSO溶解，進(jìn)行檢測(cè)。
這個(gè)方法是常用的MTT方法，但是會(huì)有三個(gè)問(wèn)題，*個(gè)是有的甲囋不容易溶解。
還有一個(gè)問(wèn)題就是，由于要讓DMSO充分溶解甲囋，所以會(huì)要混勻，就會(huì)產(chǎn)生泡沫，影響酶標(biāo)儀讀值：
第三個(gè)問(wèn)題，就是在吸去培養(yǎng)基的時(shí)候，容易把甲囋也吸走，導(dǎo)致終讀值不準(zhǔn)。
當(dāng)然也不是沒(méi)有辦法的，這篇文獻(xiàn)中提到在DMSO中加入8到800mM的氨的堿性DMSO能更快更好地溶解甲囋：
當(dāng)然，這個(gè)也是有人親測(cè)可用的。不過(guò)，我們還是來(lái)談?wù)劻硪环N溶劑哈，就是傳說(shuō)中的三聯(lián)液，這個(gè)其實(shí)是1983年Mosmann大神*次發(fā)明MTT法時(shí)所采用的溶解液：
初的版本是酸化異丙醇，也就是加入了0.04N的鹽酸的異丙醇。但是后來(lái)又衍生成為了：SDS10g，異丁醇5ml，0.1ml的10M HCl，用雙蒸水溶解配成100ml溶液，這就是三聯(lián)液。
三聯(lián)液的優(yōu)點(diǎn)在于不用吸去培養(yǎng)基，當(dāng)然，缺點(diǎn)就是要溶解很久。不過(guò)加完三聯(lián)液后可以過(guò)夜，第二天再測(cè)。
還有一種檢測(cè)方法也很常見(jiàn)，就是CCK8，和MTT的區(qū)別就在于……貴。比如MTT要5分錢，CCK8差不多就5毛……還有一點(diǎn)就是，CCK8會(huì)形成水溶性的橙色甲囋，MTT形成的是紫色的有機(jī)溶劑溶解的甲囋。
所以CCK8加入后，就直接等4小時(shí)左右，讓橙色甲囋溶解到培養(yǎng)基就能檢測(cè)了。而MTT，就需要用DMSO再溶解出來(lái)……
