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細胞培養(yǎng)實驗
點擊次數(shù)：2376 發(fā)布時間：2021-12-15
細胞培養(yǎng)（cell culture）是指在體外模擬體內環(huán)境（無菌、適宜溫度、酸堿度和一定營養(yǎng)條件等），使之生存、生長、繁殖并維持主要結構和功能的一種方法。細胞培養(yǎng)也叫細胞克隆技術，在生物學中的正規(guī)名詞為細胞培養(yǎng)技術。不論對于整個生物工程技術，還是其中之一的生物克隆技術來說，細胞培養(yǎng)都是一個關鍵的過程，細胞培養(yǎng)本身就是細胞的大規(guī)?？寺 ＜毎囵B(yǎng)技術可以由一個細胞經過大量培養(yǎng)成為簡單的單細胞或極少分化的多細胞，這是克隆技術必要的環(huán)節(jié)，而且細胞培養(yǎng)本身就是細胞的克隆。細胞培養(yǎng)技術是細胞生物學研究方法中重要和常用技術，通過細胞培養(yǎng)既可以獲得大量細胞，又可以借此研究細胞的信號轉導、細胞的合成代謝、細胞的生長增殖等。
細胞培養(yǎng)實驗室組建的基本要求:
1、細胞培養(yǎng)是一種無菌操作技術，要求工作環(huán)境和條件必須保證無微生物污染和不受其它有害因素的影響。
2、細胞培養(yǎng)室和設計原則是防止微生物污染和有害因素影響，要求工作環(huán)境清潔、空氣清新，干燥和無煙塵。
3、細胞培養(yǎng)室的設計原則一般是無菌操作區(qū)設在室內較少走動的內側，常規(guī)操作和封閉培養(yǎng)于一室，為10萬級潔凈環(huán)境的潔凈室。而洗刷消毒工作設在潔凈室外，避免物品污染潔凈室內環(huán)境。細胞潔凈室需要一個空調系統(tǒng)并對外界保持一定的正壓。
4、解剖實驗室主要用于對器官組織的分離，需要有無菌操作臺、解剖顯微鏡、各種手術器材等組織細胞培養(yǎng)室除一般實驗室的普通常規(guī)設備外，尚有一些特殊需要的設備?；究煞譃閮纱箢悾?/strong>
I. 細胞培養(yǎng)實驗室常用的基本儀器設備
1.顯微鏡：倒置顯微鏡——是組織細胞培養(yǎng)室所必需的日常工作常規(guī)使用設備之一，便于掌握細胞的生長情況并觀察有無污染等。
2.培養(yǎng)箱：體外培養(yǎng)的細胞和體內細胞一樣，需要在恒定的溫度下生存，大多數(shù)情況下，最適溫度是37℃，溫差變化一般不應超過±0.5℃，細胞在溫度升高2℃ 時，持續(xù)數(shù)小時即不能耐受，40℃以上將很快死亡。因此需要有能控制溫度的培養(yǎng)箱，如具有較高靈敏度的恒溫培養(yǎng)箱及CO2培養(yǎng)箱。
3.干燥箱：用于細胞培養(yǎng)箱的有些器械、器皿需要烘干后才能使用，玻璃器皿等須干熱消毒。
4.水純化裝置：細胞培養(yǎng)對水的質量要求較高，細胞培養(yǎng)以及與細胞培養(yǎng)工作相關的液體的配制用水必須事先嚴格純化處理。進行細胞培養(yǎng)時配制各種培養(yǎng)液及試劑等均需使用三次蒸餾水：即使是用于玻璃器皿的沖洗，也應使用二次以上蒸餾水。
5.冰箱：細胞培養(yǎng)室必須配備。
a、普通冰箱或冷藏柜——儲存培養(yǎng)液、生理鹽水等培養(yǎng)用的物品及短期保存組織標本。
b、低溫冰箱（-20℃）——用于儲存需要冷凍保存生物活性及較長時期存放的制劑，如酶、血清等。
6.細胞冷凍儲存器：儲存器常用的是液氮容器。根據(jù)使用需要分為不同的類型及多種規(guī)格。選擇購置液氮容器時要綜合考慮容積大小，取放使用方便及液氮揮發(fā)量（經濟）三種因素。
7.離心機：進行細胞培養(yǎng)時，常規(guī)需要進行制備細胞懸液、調整細胞密度、洗滌、收集細胞等工作，通常需要使用實驗室離心機。一般可常規(guī)配置4000rpm的臺式離心機，例如細胞沉降，使用低速離心機即可，離心力過大有時可能引起細胞的損傷。
8.天平：常用的有扭力天平、精密天平及各種電子天平。
9.消毒器：一般為高壓蒸汽滅菌鍋，直接或間接與細胞接觸的物品均需消毒滅菌處理。
10.濾器：目前細胞培養(yǎng)工作中采用的培養(yǎng)用液，包括人工合成培養(yǎng)液、血清、消化用胰酶等常含有維生素、蛋白、多肽、生長因子等物質，這些物質在高溫或射線照射下易發(fā)生變性或失去功能，因而上述液體多采用濾過消毒以除去細菌。目前常使用的濾器有玻璃濾器和微孔濾器，各種濾器有其使用原理和特點。
培養(yǎng)瓶：由玻璃或塑料制成。主要用于培養(yǎng)、繁殖細胞。進行培養(yǎng)時培養(yǎng)瓶瓶口加蓋螺旋瓶蓋或膠塞，膠塞多用于密封培養(yǎng)。
培養(yǎng)皿：由玻璃或塑料制成，供盛取、分離、處理組織或做細胞毒性、集落形成、單細胞分離、同位素摻入、細胞繁殖等實驗使用。常用的培養(yǎng)皿規(guī)格有 10cm、9cm、6cm、3.5cm等。
多孔培養(yǎng)板：為塑料制品。可供細胞克隆及細胞毒性等各種檢測實驗使用。其優(yōu)點是節(jié)約樣本及試劑，可同時測試大量樣本，易于進行無菌操作。培養(yǎng)板分為各種規(guī)格，常用的規(guī)格有：96孔、24孔、12孔、6孔、4孔等。
II、細胞培養(yǎng)實驗室特殊設備
細胞培養(yǎng)實驗室除了應配備上述的常用基本設備以外，如有條件，可添置一些特殊或先進的設備儀器，以便更有效、更精確、更深入地進行實驗室工作。例如：
（1）酶聯(lián)免疫檢測儀——可用于進行免疫學測定及細胞毒性、藥物敏感性檢測等。
（2） 超低溫冰箱（-80℃）——便于儲存某些試劑及標本。
（3）旋轉培養(yǎng)器——用于某些特殊細胞或需要收獲大量細胞的培養(yǎng)。
（4） 熒光顯微鏡——進行熒光染色樣本的觀察。
（5） 流式細胞儀——可更精確及快速檢測細胞。
（6）用于檢測細胞培養(yǎng)條件的各種儀器，例如專門為快速分析細胞培養(yǎng)基中主要或關鍵營養(yǎng)成分、代謝產物及氣體含量設計的多功能細胞培養(yǎng)分析儀、手提式CO2濃度測定儀等。
2 細心+實驗條件允許
3 培養(yǎng)細胞需要有備份的條件下去嘗試新的培養(yǎng)方式，否則實驗失敗了導致細胞株也沒了。實驗記錄詳細完整也是很關鍵的
4.選擇合適的實驗室儀器。