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谷氨酸合成酶(GOGAT)活性檢測(cè)試劑盒

粗酶液提?。杭?xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）； 8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

測(cè)定步驟： 1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng) 340nm，蒸餾水調(diào)零。

2、 樣本測(cè)定（1）在試劑二中加入 18mL 試劑一充分溶解混勻，置于 37℃（哺乳動(dòng)物）或 25℃（其它物種）水浴 5min；現(xiàn)配現(xiàn)用；（2）在微量石英比色皿或96孔板中加入20μL樣本和180μL試劑二，混勻，立即記錄340nm 處 20s 時(shí)的吸光值 A1 和 5min20s 后的吸光值 A2，計(jì)算 ΔA=A1-A2。

谷氨酸合成酶(GOGAT)活性檢測(cè)試劑盒

GOGAT 活性計(jì)算：

a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：?jiǎn)挝坏亩x：每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。 GOGAT（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109 ]÷(V 樣×Cpr) ÷T=321×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計(jì)算：?jiǎn)挝坏亩x：每 g 組織每分鐘消耗 1 nmol NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。 GOGAT（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109 ]÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=321×ΔA÷W

（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：?jiǎn)挝坏亩x：每 1 萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗 1 nmol NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。 GOGAT（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109 ]÷(500×V 樣÷V 樣總) ÷T=0.642×ΔA V 反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L；ε：NADH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.02 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬。

b.用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：?jiǎn)挝坏亩x：每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。 GOGAT（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109 ]÷(V 樣×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計(jì)算：?jiǎn)挝坏亩x：每 g 組織每分鐘消耗 1 nmol NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。 GOGAT（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109 ]÷(W× V 樣÷V 樣總) ÷T=643×ΔA÷W

（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：?jiǎn)挝坏亩x：每 1 萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗 1 nmol NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。 GOGAT（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109 ]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=1.286×ΔA V 反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L；ε：NADH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d： 96 孔板光徑，0.5cm；V 樣：加入樣本體積，0.02 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬。

谷氨酸合成酶(GOGAT)活性檢測(cè)試劑盒

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存；試劑一：液體 20mL×1 瓶，4℃保存；試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存；