 | 重慶市華雅干細(xì)胞技術(shù)有限公司 |
會(huì)員.png)
13
15021010459
當(dāng)前位置：首頁(yè)>>技術(shù)中心>>技術(shù)文章>>CD34+造血干細(xì)胞轉(zhuǎn)染神器：ProteanFect Max
在線溝通：
顏先生 （經(jīng)理）
- 電話：
- 400-021-2200
- 手機(jī)：
- 15021010459
- 傳真：
- 023-63419626
- 聯(lián)系我時(shí)，
- 告知來(lái)自化工儀器網(wǎng)
- 個(gè)性化：
- www.hystemcell.cn
- 商鋪網(wǎng)址：
- http://www.cdbihui.com/st275923/
- 公司網(wǎng)站：
- https://www.ys-bio.cn/
CD34+造血干細(xì)胞轉(zhuǎn)染神器：ProteanFect Max
閱讀：415發(fā)布時(shí)間：2025-1-15
CD34+造血干細(xì)胞是血液系統(tǒng)中的關(guān)鍵細(xì)胞，具有自我更新和多向分化潛能。通過(guò)轉(zhuǎn)染技術(shù)，可以研究基因功能并開(kāi)發(fā)新的治療策略。ProteanFect Max作為一種高效的轉(zhuǎn)染試劑，已被證明能顯著提高mRNA轉(zhuǎn)染效率，且對(duì)細(xì)胞分化影響較小。
2. 材料與方法
2.1 CD34+造血干細(xì)胞的分選
使用動(dòng)員人單采血或臍帶血，通過(guò)陽(yáng)性選擇分選試劑盒分離CD34+細(xì)胞。推薦使用Lymphoprep™（Stemcell, 07861）作為分離試劑，以及CD34 MicroBead Kit, human（Miltenyi Biotec, 130-046-702）進(jìn)行細(xì)胞分選。
2.2 培養(yǎng)基的配制
- SFEM II培養(yǎng)基（Stemcell, 09655）和StemSpan™ CC100（Stemcell, 02690）以99:1比例混合。
- 若添加抗生素，需稀釋1000倍。
- 配制完成后，培養(yǎng)基應(yīng)放置于4°C冰箱儲(chǔ)存，并盡量在1個(gè)月內(nèi)使用完。
2.3 細(xì)胞培養(yǎng)與傳代
- 分選后的CD34+細(xì)胞以300g離心5分鐘，用1 mL完·全培養(yǎng)基重懸后計(jì)數(shù)。
- 根據(jù)計(jì)數(shù)結(jié)果，將細(xì)胞重懸至105 cells/mL的密度，接種到T25培養(yǎng)瓶或細(xì)胞培養(yǎng)板中。
- 3天后補(bǔ)液一次，若進(jìn)行轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)，需調(diào)整細(xì)胞密度至2×105 cells/mL，并隔天補(bǔ)液。
2.4 轉(zhuǎn)染操作
- 轉(zhuǎn)染核酸：mRNA。
- 轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基：使用Opti-MEM培養(yǎng)基或無(wú)血清RPMI 1640/無(wú)血清DMEM培養(yǎng)基。
- 轉(zhuǎn)染體系：配置ProteanFect Max轉(zhuǎn)染體系，具體protocol需參考私戳獲取。
- 細(xì)胞準(zhǔn)備：確保細(xì)胞活率超過(guò)90%，避免反復(fù)離心。
- 轉(zhuǎn)染過(guò)程：孵育時(shí)間建議15分鐘，適當(dāng)延長(zhǎng)可提高轉(zhuǎn)染率，但可能影響細(xì)胞活力。
- 效率檢測(cè)：使用陽(yáng)性對(duì)照mRNA，轉(zhuǎn)染后5-48小時(shí)內(nèi)觀察EGFP表達(dá)。細(xì)胞活率可通過(guò)鏡下觀察、臺(tái)盼藍(lán)、AO/PI染色或流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)。
3. 結(jié)果
使用ProteanFect Max轉(zhuǎn)染的CD34+造血干細(xì)胞顯示出高達(dá)72.3%的mCherry+表達(dá)率，而未處理組僅為0.25%。此外，轉(zhuǎn)染后細(xì)胞的分化狀態(tài)未受顯著影響，CD71+CD235-細(xì)胞比例在轉(zhuǎn)染后第2天和第3天保持穩(wěn)定。
華雅思創(chuàng)生物®專注于提供CGT、分子診斷和先進(jìn)醫(yī)療的生物試劑和醫(yī)療耗材產(chǎn)品，我們的客戶遍及細(xì)胞治療、疫苗抗體、醫(yī)療診斷、腦科學(xué)、合成生物、長(zhǎng)壽研究和醫(yī)美保健等領(lǐng)域。"買(mǎi)試劑，找華雅"，華雅思創(chuàng)生物®憑借深厚的技術(shù)實(shí)力和嚴(yán)格的質(zhì)量控制體系，已成為眾多科研機(jī)構(gòu)和生物制藥企業(yè)的首·選供應(yīng)商。
重慶市華雅干細(xì)胞技術(shù)有限公司主營(yíng)產(chǎn)品：Lonza支原體檢測(cè)試劑盒,Stemcell胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)基,StemRD生長(zhǎng)分化因子
化工儀器網(wǎng) 設(shè)計(jì)制作，未經(jīng)允許翻錄必究.Copyright(C) http://www.cdbihui.com, All rights reserved.
以上信息由企業(yè)自行提供，信息內(nèi)容的真實(shí)性、準(zhǔn)確性和合法性由相關(guān)企業(yè)負(fù)責(zé)，化工儀器網(wǎng)對(duì)此不承擔(dān)任何保證責(zé)任。 溫馨提示：為規(guī)避購(gòu)買(mǎi)風(fēng)險(xiǎn)，建議您在購(gòu)買(mǎi)產(chǎn)品前務(wù)必確認(rèn)供應(yīng)商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量。