全自動垂直振蕩提取-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定魚肉中地西泮殘留量
單長海 ,馬作江 ,楊周 ,黃山 ,李翔 ,孫輝
（國家富硒產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)檢測中心，湖北恩施 445000）
DOI；10.3969/j.issn.1008-6145.2024.07.011
地西泮又名安定，屬于苯二氮卓類鎮(zhèn)靜劑，具有鎮(zhèn)靜、抗驚厥等作用[1]。近年來，一些不法商販在魚類的捕撈和運(yùn)輸過程中非法使用地西泮，導(dǎo)致其在水產(chǎn)品中殘留[2]。魚肉是日常生活重要的食物，人體長期攝入含有地西泮殘留的魚肉后，會產(chǎn)生一系列副作用，如易怒、嗜睡、幻聽、頭痛、乏力等，甚至可能導(dǎo)致藥物依賴和耐藥性，嚴(yán)重威脅人體健康[3-4]。許多國家已將地西泮列為動物養(yǎng)殖和運(yùn)輸過程中禁止使用的藥物，GB 31650—2019《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中獸藥最大殘留量》規(guī)定魚肉中不檢出地西泮。目前，從魚肉中地西泮的監(jiān)管檢驗(yàn)情況來看，檢出率較高，是市場監(jiān)管部門重點(diǎn)監(jiān)管對象。
國家富硒產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)檢測中心發(fā)表的文章中，作者采用乙腈作為提取溶劑，V20垂直振蕩器提取，MCX固相萃取小柱凈化，并通過液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測，方法提取效率高，凈化效果好，降低了樣品基質(zhì)干擾，提高了方法準(zhǔn)確性，可用于魚肉中地西泮殘留量的大批量檢測。
實(shí)驗(yàn)相關(guān)
1、?？萍瘓F(tuán) 產(chǎn)品支撐
2、實(shí)驗(yàn)步驟
2.1樣品處理
稱取魚肉試樣2 g(精確至0.01 g)于50 mL離心管中，加入15 mL乙腈，在垂直振蕩儀中以1 000 r/min振蕩5 min。然后，以10000 r/min離心5 min，將上清液轉(zhuǎn)入另一50 mL離心管中。對殘?jiān)偌尤?5 mL乙腈，重復(fù)提取并離心一次，合并兩次上清液，并用氮?dú)獯蹈?。加? mL 5%(體積分?jǐn)?shù))乙酸水溶液，渦旋1 min。用3 mL甲醇和3 mL水依次活化MCX萃取柱，取備用液過柱，用5 mL 5%(體積分?jǐn)?shù)，下同)乙酸水溶液洗滌，抽干，再用5 mL 10%氨水甲醇溶液洗脫，收集洗脫液，并在40 ℃下用氮?dú)獯蹈?。?.0 mL 20%乙腈水溶液溶解殘?jiān)ㄟ^0.22 μm濾膜過濾，待上機(jī)測試。
2.2實(shí)驗(yàn)方法
以目標(biāo)化合物質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。取經(jīng)樣品處理的待測溶液進(jìn)行測定，將目標(biāo)物色譜峰面積代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程中，得到樣品提取液質(zhì)量濃度，代入樣品質(zhì)量及提取液體積進(jìn)行換算得到樣品中目標(biāo)物的質(zhì)量濃度。
提取方式的選擇
V20垂直振蕩器，可以根據(jù)需要設(shè)置振蕩頻率，無需人工操作。比較提取5min振動頻率分別為500、800、1000、1200、1500 次/min的提取效率，每個頻率稱取3個平行質(zhì)控樣，按照2.1樣品處理的方法進(jìn)行樣品提取回收率試驗(yàn)。圖1為不同振蕩頻率提取的魚肉粉中地西泮殘留量回收率，從圖1中可以看出，當(dāng)振動頻率高于1000次/min時，提取效率無明顯差別，因此提取頻率采用1000次/min。
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圖1 不同振蕩頻率提取的魚肉粉中地西泮殘留量回收率
比較超聲提取法、渦旋提取法和全自動垂直振蕩儀提取法對質(zhì)控樣中地西泮提取的提取回收率，提取時間分別為5、10、15、20、30 min。按照2.1樣品處理的方法進(jìn)行樣品提取回收率試驗(yàn)。圖2為三種不同提取方式的魚肉粉中地西泮回收率，從圖2可以看出，超聲法提取效率較低，可能是塑料離心管阻礙了超聲波的傳遞，渦旋法提取效率次之，全自動垂直振蕩提取法效率非常高。綜合以上，選擇全自動垂直振蕩提取法，以實(shí)現(xiàn)批量操作，省時省力，操作簡單。
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圖2 三種不同提取方式的魚肉粉中地西泮回收率
完整版論文收錄在《化學(xué)分析計(jì)量》
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