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挑戰(zhàn)性液體如何精準移液？
以高準確度和精度重復進行揮發(fā)性、粘性、起泡和油性液體移液相當具有挑戰(zhàn)性。由于這些液體的固有特性，它們可能會粘在塑料上或滴漏。這些挑戰(zhàn)只需遵循良好移液實踐和考慮液體的具體特性即可克服。
在本實用指南中，我們提供了一些建議，幫助您選擇配有兼容移液器吸頭的合適移液器，以及針對困難液體的正確移液技術(shù)。
應該選擇哪種移液器？
為獲得盡量準確和可重復性結(jié)果，請選擇標稱容量（最大容量）接近移液量的移液器。圖1顯示了使用賽多利斯Picus® 50-1,000μL 移液器和5 - 120μL 移液器進行的兩組100μL 乙醇移液操作。對于Picus® 5 - 120μL 移液器，當操作者、移液模式（反向移液）和移液技術(shù)（預潤洗循環(huán)次數(shù)）保持不變時，可獲得更好的準確度和再現(xiàn)性。
圖1.在最大容量時，移液的準確度和再現(xiàn)性最好
在反向移液中，吸液量超過目標體積。將柱塞壓到第一個停止位置后，排出總目標體積，多余的量會留在吸頭中。多余的量可返回吸頭中繼續(xù)使用，也可通過將柱塞壓到第二個停止位置來廢棄吸頭中的多余液體。在某些情況下，存在余量對移液性能有明顯好處，例如移液揮發(fā)性或粘性液體時。這些移液技術(shù)之間的差異如圖2所示。
圖2.基本移液模式圖解 A.正向移液 B.反向移液
電動移液器提供額外移液技術(shù)，有助于減少移液的差異和時間。其中包括多次分液、多次吸液、稀釋和滴定等。
應該用哪種移液技術(shù)？
正向移液和反向移液是手動移液器可使用的兩種基本移液模式?；镜牧己貌僮靼▽⒁后w吸入吸頭時保持移液器直立（0° 角）狀態(tài)，將液體排液到目標容器時將移液器稍微傾斜（30-45° 角）。
圖3A顯示了移取1,000μL水時的吸液角度對準確度的影響。隨著吸液角度的增加，實際移液量幾乎呈直線增加。圖3B顯示了使用反向移液技術(shù)排液時，將移液器保持在0°角而非45°角對準確度和精度的負面影響。反向移液1,000μL 水時，將移液器保持在45°角可獲得更精準的結(jié)果。
圖3.吸液和分液角度對準確度和精度的影響
如何應對液體從移液器吸頭滴落？
如果液體從移液器吸頭滴落，應首先確保吸頭正確密封在移液器的吸頭圓錐上。圖4顯示了使用不同制造商的移液器吸頭時的移液性能差異。
圖4.吸頭和移液器：兼容性很重要
注：不同移液器吸頭與Tacta® 10 μL 移液器結(jié)合用于測量10 μL。每個數(shù)據(jù)點代表用同一移液器吸頭進行的10 次測量。每種顏色對應一個移液器吸頭品牌，其中“A” 為賽多利斯移液器吸頭，“B-E” 為其他制造商吸頭。一個品牌內(nèi)的數(shù)據(jù)點之間的分布顯示了同一吸頭盒內(nèi)的各吸頭間的差異。
如果在轉(zhuǎn)移揮發(fā)性液體以外的其他液體時有大量泄漏的情況，請檢查移液器吸頭圓錐是否干凈；使用無紡布和合適的清潔劑（如乙醇）將其擦拭干凈。檢查吸頭圓錐或活塞和套筒之間的密封件有無損壞。
揮發(fā)性液體
移取揮發(fā)性液體和溶劑（如乙醇、丙酮或乙腈）時，從移液器吸頭滴落是常見現(xiàn)象。為避免滴落，請預潤洗吸頭，反向移液更有助于改善滴漏情況。
圖5A顯示了在處理乙腈時，無預潤洗的正向移液和適當預潤洗的反向移液之間的差異。同樣的建議適用于任何容量，如圖5B 所示。
圖5.移取揮發(fā)性液體
粘性液體
緩慢的吸液和排液速度至關(guān)重要，因此實現(xiàn)粘性液體的可靠移液其實只需適當?shù)募夹g(shù)和耐心。反向移液可提高準確度。還需注意的是，請勿將吸頭浸入液體太深。此外，吸液時，移液器吸頭應在液體中多浸幾秒鐘，因為這樣將使液體足以全部吸入到吸頭中。排液時，建議將吸頭抵住目標容器壁，使液體附著在目標容器上。寬口吸頭也可用于促進液體流動，尤其是在溶液中有顆粒的情況下。
圖6顯示了采用反向移液和Optifit 寬口吸頭移取1,000μL甘油與采用正向移液和標準Optifit 吸頭移取1,000μL 甘油的差異。
Picus® Nxt 移液器在用戶認為有幫助的情況下，可通過正向移液進行重復吹出。
圖6. 移取粘性液體
油類
與正向移液相比，反向移液油的排液更準確，再現(xiàn)性更好。
在圖7中，使用賽多利斯Tacta® 10-100μL 手動移液器移取丁香酚。
圖7. 油類移液
泡沫液體
含清潔劑或蛋白質(zhì)的液體容易起泡。處理這些液體時，必須緩慢移液并使用反向移液技術(shù)。
移液器應多久維護一次？
經(jīng)常清潔移液器是一種良好操作。每天擦拭外部和吸頭圓錐可減少交叉污染機率，并確保正確吸頭密封。清潔移液器下端內(nèi)部可去除積聚的灰塵，這有助于活塞密封并保持較低的操作力。清潔還有助于發(fā)現(xiàn)移液器是否因溶劑或蒸汽而老化，以免影響結(jié)果。
請記住，無論何時拆裝下端，最好在分析天平上檢查移液器性能，確認組裝正確，無任何東西阻礙活塞的完全密封。
建議移液器的最長維護間隔時間為一年。但應根據(jù)移液頻率、已移液的液體以及移液器的使用年限和型號等因素來調(diào)整間隔時間。校準應至少每年進行一次，或根據(jù)使用頻率每3 - 6 個月進行一次。更換移液器零件（如吸頭圓錐或活塞）后，還應進行校準；現(xiàn)場高壓滅菌后，只需進行性能檢查。
總結(jié)
移液技術(shù)在獲得理想結(jié)果方面具有核心作用。移取具有挑戰(zhàn)性液體時，學會利用反向移液非常有用。良好實踐是始終首先考慮液體，并相應采取移液操作。
表1總結(jié)了各種液體的建議移液技術(shù)。
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