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通用型 DNA 損傷彗星銀染檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)
閱讀：1484 發(fā)布時(shí)間：2021-9-8| 提 供 商 | 上海哈靈生物科技有限公司 | 資料大小 | 142.9KB |
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主要用途
通用型 DNA 損傷彗星銀染檢測(cè)試劑是一種旨在采用組織細(xì)胞堿性凝膠電泳，在電場(chǎng)環(huán)境下，損傷變性的 DNA 片段遷移形成特定的形態(tài)，即 DNA 移動(dòng)尾巴，來(lái)進(jìn)行體外評(píng)價(jià)和半定量分析 DNA 損傷程度的 而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于新鮮動(dòng)物細(xì)胞、組織、血液、骨髓 等樣品的 DNA 損傷研究，包括 DNA 鏈斷裂、氧化性堿基損傷、DNA 剪切損傷、DNA 交聯(lián)、DNA 修復(fù)等， 應(yīng)用于環(huán)境和藥物毒理學(xué)、放射學(xué)、氧化應(yīng)急反應(yīng)等研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，性能穩(wěn)定，操作簡(jiǎn) 便，重復(fù)一致。
技術(shù)背景
彗星檢測(cè)技術(shù)（Comet assay），又稱(chēng)為單細(xì)胞凝膠電泳檢測(cè)技術(shù)（single cell gel electrophoresis assay；SCGE） 或微凝膠電泳檢測(cè)技術(shù)（microgel electrophoresis assay），是基于變性切離的DNA片段，在電場(chǎng)的影響下， 從細(xì)胞中移出的原理，而完整的超螺旋DNA仍然保持在細(xì)胞核內(nèi)。通過(guò)凝膠電泳，呈現(xiàn)出分子遷移圖形， 形成彗星拖尾（comet tail）現(xiàn)象，即完整DNA的細(xì)胞染色體為“頭"，而松散和斷裂的DNA為“尾"，以此評(píng) 價(jià)DNA損傷程度。這是分析單一細(xì)胞DNA鏈斷裂的敏感方法之一。其技術(shù)方法的基本步驟是：第一，細(xì)胞 固定包埋在凝膠里；第二，細(xì)胞裂解處理；第三，DNA變性處理；第四，電泳遷移；第五，染色和圖像分 析。由此觀察DNA遷移形態(tài)，進(jìn)行體外檢測(cè)，成為細(xì)胞DNA損傷研究的基本手段。其中電泳條件將決定檢 測(cè)的敏感程度。堿性電泳（alkaline electrophoresis）為常規(guī)電泳檢測(cè)，可以檢測(cè)單鏈DNA斷裂、雙鏈DNA 斷裂、大部分無(wú)嘌呤核酸位點(diǎn)（apurinic site）和無(wú)嘧啶核酸位點(diǎn)（apyrimidic site）、堿不穩(wěn)定DNA結(jié)合物 （alkali-labile DNA adduct）等DNA損傷。
用戶(hù)自備 無(wú)離子水：用于稀釋電泳緩沖液 磨砂載玻片和蓋玻片：用于放置樣品進(jìn)行微凝膠電泳的器材 電泳槽：用于微凝膠電泳的裝置 恒溫培養(yǎng)箱或恒溫水槽：用于孵育反應(yīng) 1.5 毫升離心管：用于樣品操作的容器 90 mm 培養(yǎng)皿：用于樣品處理、染色等的容器 光學(xué)顯微鏡：用于觀察細(xì)胞彗星現(xiàn)象
注意事項(xiàng) 1． 本產(chǎn)品為 20 次操作 2． 操作時(shí)，須戴手套 3． 整個(gè)操作，建議在暗光下進(jìn)行 4． 建議使用新鮮培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞、組織、血液等；細(xì)胞量為 105細(xì)胞/毫升 5． 可以使用 100 微摩爾過(guò)氧化氫或 25 微摩爾高錳酸鉀冰上孵育 10 分鐘預(yù)處理樣品作為陽(yáng)性對(duì)照 6． 電泳液（Reagent E）： 10 倍濃度為 3 摩爾 NaOH，10 毫摩爾 EDTA，pH 13.5 7． 凈化液（Reagent F）： 70%ETHANOL 8． 操作時(shí)小心輕柔，避免膠體脫位 9． 電泳溫度過(guò)高，會(huì)造成膠體脫位5 10．電泳時(shí)，電壓 25 伏為佳，建議控制電泳液量達(dá)到要求 11．細(xì)胞 DNA 損傷彗星圖像如下（400 倍）