化工儀器網
技術文章
帕金森模型科研實驗技術服務介紹
閱讀：130 發(fā)布時間：2024-9-24應用簡介
帕金森氏?。≒arkinson’s Disease，PD）是一種會影響運動的進行性神經系統(tǒng)疾病，老年人多見，平均發(fā)病年齡在60歲左右，癥狀會逐漸出現(xiàn)，有時始于不易察覺的單手震顫，還常導致僵硬或運動緩慢。除此之外帕金森患者也表現(xiàn)出了感覺障礙和認知功能障礙等非運動癥狀。
其主要病理變化是黑質致密部（SNpc）中多巴胺（DA）能神經元進行性丟失并伴有紋狀體多巴胺水平的下降、α-突觸核蛋白（α-synuclein, α-Syn））為主要成分的路易小體的形成，致使得腦部指揮肌肉活動的能力受到不同程度的限制，大大阻礙了患者的活動能力。
導致這一病理變化的確切因素尚不清楚，遺傳因素、環(huán)境因素、年齡老化、氧化應激等均可能參與PD多巴胺能神經元的變性死亡過程。
PD的發(fā)病機制和各作用靶點之間的聯(lián)系仍是現(xiàn)今研究的熱點，因此在基礎研究中模型的制備對PD的研究具有舉足輕重的作用。總的來說，PD模型主要分為兩類，一是誘發(fā)性動物模型，二是基因修飾動物模型。
造模方法
在注射當天配制好新鮮的MPTP溶液，然后腹腔或皮下注射MPTP。試劑要現(xiàn)用現(xiàn)配。
根據實驗要求和目的，可分為快速模型和慢速模型。
快速模型可分為單次注射和多次注射。單次注射的劑為30mg/kg，該模型損傷輕，易恢復；多次注射的劑量為20mg/kg，每隔2h注射1次，共3-4次，該模型損傷快且嚴重，DA神經元的損傷到死亡可以在3d內完成。
慢速模型需多次注射，每天1次，單次注射的劑量為20mg/kg,連續(xù)注射5-7d。該模型的成活率較高，實驗周期較長。
模型驗證：
（1）造模后進行行為學觀察參照Francois的實驗方法(包括行動遲緩實驗、抓握實驗和尾強直實驗記錄強直癥狀的變化、震顫實驗)記錄帕金森氏病的三大癥狀，觀察到小鼠出現(xiàn)尾巴僵硬豎直，身體出現(xiàn)非自主性震顫，自發(fā)活動減少，表明帕金森模型構建成功。
（2）離體腦組織中黑質、紋狀體免疫組化染色
MPTP在注射后，7d對小鼠黑質致密部（SNpc）和紋狀體（Striatum）免疫染色。結果所示，在進行造模后，小鼠紋狀體（Striatum）末端和黑質致密部（SNpc）的酪氨酸羥化酶(TH)陽性細胞體和纖維所形成的的網狀結構密度顯著降低，且TH陽性細胞數量顯著降低，TH陽性纖維密度顯著降低。
MPTP誘導的小鼠帕金森模型由于造模技術相對簡單（只需要腹腔注射）、對多巴胺神經元的殺傷效果穩(wěn)定也得到了廣泛的認可。不少關于多巴胺能神經元死亡機制方面的研究都采用MPTP誘導的小鼠帕金森模型作為實驗范式。
Tips：
（1）MPTP誘導的小鼠帕金森模型對動物的性別、體重、年齡甚至品系來源均非常敏感，因此在挑選動物的時候要十分小心。
C57BL小鼠對MPTP最為敏感，而CF-W小鼠、FVB／N小鼠和Balb/C小鼠對MPTP的敏感性較C57BL小鼠稍差，CF-1和CD-1對MPTP的敏感性最差。目前較常用的小鼠為C57BL/6小鼠。
老齡鼠較青年鼠對MPTP更為敏感。
（2）在注射前務必適應性飼養(yǎng)1周左右。因為長距離運輸會改變腦的狀態(tài)，因此需要5-7天時間來使動物恢復并適應環(huán)境。
（3）未被代謝的MPTP將會隨著動物的排泄物被釋放到墊料中，因此在注射之后小鼠需要進行嚴格的隔離飼養(yǎng)。其使用的墊料、飲水必須經過無害化處理，然后作為醫(yī)療垃圾廢棄。
（4）MPTPyou劇毒，在稱量溶解和注射時一定做好個人的防護工作。
