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ELISA試劑盒樣本處理方法
閱讀：147 發(fā)布時(shí)間：2025-2-28?一、核心處理流程?
?1. 樣本類型與預(yù)處理?
?樣本類型 | ?處理方法（步驟） | ?關(guān)鍵注意事項(xiàng) |
?血清 | 全血靜置30分鐘（室溫），離心2000×g 10分鐘（4℃），取上清 | 避免溶血；避免反復(fù)凍融（最多3次） |
?血漿? | 抗凝全血（EDTA/肝素）離心3000×g 15分鐘（4℃），取上層血漿 | 抗凝劑需與試劑盒兼容（詳見說明書） |
?細(xì)胞上清 | 直接離心1000×g 5分鐘去除細(xì)胞碎片，上清分裝保存 | 避免細(xì)胞裂解污染（可能干擾檢測） |
?組織勻漿 | 組織剪碎后液氮研磨，按比例加入PBS（含蛋白酶抑制劑）勻漿，離心12000×g 20分鐘取上清 | 控制總蛋白濃度（建議1-10 mg/mL） |
?尿液/唾液 | 離心2000×g 10分鐘去除沉淀，上清加入0.1% BSA穩(wěn)定 | 檢測前需稀釋（避免高鹽/酸堿干擾） |
?
2. 保存與運(yùn)輸?
短期保存?：4℃冷藏（≤24小時(shí)），避免微生物滋生。
長期保存?：-80℃分裝凍存（避免反復(fù)凍融），使用凍存管標(biāo)注批次/日期。
運(yùn)輸?：干冰（-80℃）或冷鏈箱（2-8℃），避免劇烈震蕩。
?二、質(zhì)量控制要點(diǎn)?
1.?樣本稀釋?
按試劑盒要求梯度稀釋（常用稀釋液：PBS+1% BSA）。
避免基質(zhì)效應(yīng)?：高脂血/溶血樣本需超速離心或過濾。
2.?干擾物處理?
去除內(nèi)源性酶?：過氧化氫酶（HRP系統(tǒng)）或堿性磷酸酶（AP系統(tǒng)）抑制劑。
去除類風(fēng)濕因子?：添加IgG阻斷劑（針對血液樣本）。
3.?質(zhì)控樣本?
陽性/陰性對照?：每板至少設(shè)置2孔。
標(biāo)準(zhǔn)曲線?：覆蓋檢測范圍（建議R2≥0.99）。
三、常見問題與解決方案
?問題 | ?可能原因 | ?解決方案 |
?OD值異常高/低 | 樣本過度稀釋/未稀釋 | 預(yù)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化稀釋比例，檢查標(biāo)準(zhǔn)曲線
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?板內(nèi)重復(fù)性差 | 離心不徹-底或氣泡干擾 | 離心后靜置5分鐘，加樣時(shí)避免產(chǎn)生氣泡
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?非特異性顯色 | 交叉反應(yīng)或封閉不充分 | 增加封閉時(shí)間（≥1小時(shí)），使用專用封閉劑 |
?提示?：不同品牌試劑盒可能存在差異，務(wù)必以說明書為準(zhǔn)！
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