魚孕激素/孕酮酶聯(lián)免疫分析
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍：
96T
50 pg/ml -1200 pg/ml
使用目的：
本試劑盒用于測定魚血清、血漿及相關(guān)液體樣本中孕激素/孕酮（PROG）含量。
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中魚孕激素/孕酮（PROG）水平。用純化的魚孕激
素/孕酮（PROG）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入孕激素 /
孕酮（PROG），再與  HRP 標(biāo)記的孕激素/孕酮（PROG）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗
體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在   HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在
酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的孕激素/孕酮（PROG）呈正相關(guān)。用
酶標(biāo)儀在  450nm 波長下測定吸光度（  OD 值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中魚孕激素/孕酮
（PROG）濃度。
魚孕激素/孕酮酶聯(lián)免疫分析試劑盒組成
30倍濃縮洗滌液
20ml×1瓶
6ml×1瓶
12孔×8條
6ml×1瓶
6ml×1瓶
6ml×1/瓶
終止液
6ml×1瓶
2   酶標(biāo)試劑
標(biāo)準(zhǔn)品（2400 pg/ml）  0.5ml×1瓶
3   酶標(biāo)包被板
4   樣品稀釋液
5   顯色劑 A液
6   顯色劑 B液
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1.5ml×1瓶
1份
10   說明書
11   封板膜
12   密封袋
2張
1個(gè)
標(biāo)本要求
1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能
馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因   NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1.  標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀
釋。
1200 pg/ml
600 pg/ml
300 pg/ml
150 pg/ml
75 pg/ml
5號標(biāo)準(zhǔn)品
4號標(biāo)準(zhǔn)品
3號標(biāo)準(zhǔn)品
2號標(biāo)準(zhǔn)品
1號標(biāo)準(zhǔn)品
150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入  150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
150μl的  5號標(biāo)準(zhǔn)品加入  150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
150μl的  4號標(biāo)準(zhǔn)品加入  150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
150μl的  3號標(biāo)準(zhǔn)品加入  150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
150μl的  2號標(biāo)準(zhǔn)品加入  150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2.  加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、

 
待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，
然后再加待測樣品 10μl（樣品zui終稀釋度為 5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。
配液：將 30倍濃縮洗滌液用蒸餾水  30倍稀釋后備用
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30秒后棄去，如此
重復(fù) 5次，拍干。
加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl，空白孔除外。
溫育：操作同 3。
洗滌：操作同 5。
顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15分鐘.
10.終止：每孔加終止液    50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)）。
11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應(yīng)在加終止
液后 15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
操作程序總結(jié)：
計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)， OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的
OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與  OD值計(jì)算出標(biāo)

準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，
即為樣品的實(shí)際濃度。
魚孕激素/孕酮酶聯(lián)免疫分析注意事項(xiàng)
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未
用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間
控制在 5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4．請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本  OD值
大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的 OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計(jì)
算時(shí)請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
10.如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個(gè)月