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IgG存在下泊洛沙姆188的LC/MS分析 (ODP2 HP-2B)
有時會在抗體藥物中添加少量表面活性劑以防止IgG聚集和吸附，表面活性劑的濃度控制對于質(zhì)量管理非常重要。以下是使用聚合物基質(zhì)反相色譜柱ODP2 HP-4D，不進(jìn)行前處理，在存在下使用蒸發(fā)光散射檢測器(ELSD)分析泊洛沙姆188的應(yīng)用實例。在堿性條件下，IgG不會在色譜柱中保留，隨著保留體積一起被色譜柱洗脫，泊洛沙姆188根據(jù)反相模式被色譜柱保留。因此，把IgG洗脫3分鐘后的洗脫液導(dǎo)入MS系統(tǒng)，無需進(jìn)行除蛋白預(yù)處理即可不受IgG的離子抑制的影響分析泊洛沙姆188。泊洛沙姆188是一種具有分子量分布的多成分表面活性劑，通過SIM模式分析其中一種成分，選擇性高，定量性好。使用泊洛沙姆188峰面積創(chuàng)建校正曲線時，在10至100 μg/mL的范圍內(nèi)可獲得高線性。 在樣品濃度為50 μg/mL時的加標(biāo)回收率也能達(dá)到96%。
Sample : 2 μL
Poloxamer 188 50 μg/mL + Polyclonal IgG (from human serum) 10 mg/mL (in H2O)
Sample : 2 μL
Poloxamer 188 50 μg/mL + Polyclonal IgG (from human serum) 10 mg/mL (in H2O)
Column : Shodex ODP2 HP-2B (2.0 mm I.D. x 50 mm)
Eluent : (A); 0.1 % NH3 aq./(B); CH3CN
High pressure linear gradient;
(B %) 20 % to 90 % (0 to 5 min), 90 % (5 to 6 min),
90 to 20 % (6 to 6.1 min), 20 % (6.1 to 8 min)
Flow rate : 0.2 mL/min
Detector : UV (280 nm), ESI-MS (SIM Positive)
Column temp. : 40 ℃