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脯氨酸（PRO）含量測試盒 抗逆系列

貨號：BC0290                                

測定意義：

    脯氨酸(Pro)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，逆境條件下，植物體內(nèi)Pro含量顯著增加。Pro增加量在一定程度上反映了抗逆性，抗旱性強(qiáng)的品種往往積累較多的脯氨酸。因此，脯氨酸增加量可以作為抗逆育種的生理指標(biāo)之一。  

測定原理：

    用磺基水楊酸（SA）提取Pro，加熱處理后，Pro與酸性茚三酮溶液反應(yīng)生成紅色；加甲苯萃取后，在520nm測定吸光度。

需自備的儀器和用品：

     可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿、冰乙酸、甲苯、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

提取液：液體50mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：冰乙酸4℃保存。（自備）

試劑二：液體45 mL×1瓶， 4℃保存。

試劑三：甲苯4℃保存。（自備）

標(biāo)準(zhǔn)品：脯氨酸 10mg，4℃保存。

樣品測定的準(zhǔn)備： 

1、細(xì)胞、細(xì)菌或組織樣品的制備 ： 

     細(xì)菌或細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，棄上清；按照每100萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率20％，超聲3秒，間隔10秒，重復(fù)30次），之后置沸水浴振蕩提取10min；10000g，常溫離心10min，取上清，冷卻后待測。

     組織：稱取約0.1g組織，加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿；之后置沸水浴振蕩提取10min，10000g，常溫離心10min，取上清，冷卻后待測。

2、血清（漿）樣品：取100μL血清（漿）加入1mL提取液，充分混勻，之后置沸水浴振蕩提取10分鐘，10000g，常溫離心10分鐘，取上清，冷卻后待測。

3、標(biāo)準(zhǔn)品的處理:稱取1mg，將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋為15、10、8、6、4、2、1、0mg/ml。

測定步驟：

1、分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長520nm，蒸餾水調(diào)零。

2、取0.5mL上清液（或稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品）+0.5mL試劑一+0.5mL試劑二于有蓋試管中，置沸水浴中保溫30min（蓋緊，防止水分散失），每10min振蕩一次。

3、待冷卻后，在試管中加入1mL試劑三，振蕩30s，靜置片刻，使色素轉(zhuǎn)試劑三中；吸取0.8mL-1mL上層溶液于1mL玻璃比色皿中，用試劑三調(diào)零，于520nm波長處比色，記錄吸光值。

4、根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品吸光值和濃度，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

Pro含量計算：

1、通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品脯氨酸含量(y為脯氨酸含量，μg/mL；x為OD值)

2、按照細(xì)菌、細(xì)胞個數(shù)或者組織鮮重計算，首先根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求得y值：

細(xì)胞或細(xì)菌中脯氨酸含量(μg/10⁴ cell)= y÷細(xì)胞濃度(10⁴ cell/mL)

Pro含量(μg/g mass) =y÷樣本鮮重(g/mL)

3、血清（漿）中脯氨酸含量，首先根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求得y值：

Pro含量[μg/mL血清（漿）] = y÷0.1mL血清（漿）/mL

注意：提取液中含有蛋白沉淀劑，提取的上清液不能用于蛋白濃度的測定。

脯氨酸（PRO）含量測試盒 抗逆系列