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土壤幾丁質(zhì)酶活性檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
貨號：BC1930
規(guī)格：50T/24S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑一：自備甲苯。

2. 試劑三：懸濁液，使用前搖勻。

3. 試劑四為飽和溶液，低溫（2-8℃）取出可能會有晶體析出，加熱使其溶解即可。

4. 試劑五：臨用前取1瓶加入25mL試劑五B，充分溶解，現(xiàn)配現(xiàn)用。用不完的試劑2-8℃可以保存4周。

5. 標(biāo)準(zhǔn)液：5mg N-乙酰氨基葡萄糖。臨用前加入1mL試劑二配制成5mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，即5000μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，2-8℃可以保存4周。

產(chǎn)品說明：
幾丁質(zhì)來源非常豐富，是自然界中僅次于纖維素的第二大類生物高聚物，由于其分解非常緩慢而大量堆積容易造成環(huán)境嚴(yán)重污染。幾丁質(zhì)酶是影響土壤中氮礦化的一種重要的酶，其分解幾丁質(zhì)控制著氮循環(huán)的關(guān)鍵步驟。
幾丁質(zhì)酶水解幾丁質(zhì)產(chǎn)生N-乙酰氨基葡萄糖，N-乙酰氨基葡萄糖與堿共熱產(chǎn)生的中間化合物可進(jìn)一步反應(yīng)產(chǎn)生顯色物質(zhì)，該顯色物質(zhì)在585nm處有特征吸收峰，吸光值增加速率反映了幾丁質(zhì)酶的活性。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、低溫離心機(jī)、可調(diào)式移液器、旋渦振蕩混勻儀、1mL玻璃比色皿、研缽、30-50目篩、甲苯（不允許快遞）、蒸餾水、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
注意事項：

1. 反應(yīng)結(jié)束后立即進(jìn)行比色。

2. 試劑五有一定的毒性，實驗操作時做好個人防護(hù)。

3. 當(dāng)A測定大于1時，建議將樣本上清液用試劑二稀釋后再進(jìn)行測定。

實驗實例：

1. 取0.15g土樣1按照測定步驟操作，使用1mL玻璃比色皿測得計算ΔA測定=A測定-A對照=0.099-0.010=0.089，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.705-0.009=0.696。根據(jù)公式計算酶活得：

土壤幾丁質(zhì)酶活性（U/g 土樣）=39×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W= 39×0.089÷0.696 ÷0.15=33.2 U/g 土樣。
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