凍存細(xì)胞時(shí)要緩慢冷凍，程序降溫，以提高細(xì)胞的存活率。目前普遍的做法是采用程序降溫儀或程序降溫盒，采用程序降溫儀價(jià)格昂貴、操作繁瑣，而程序降溫盒在生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室中廣泛使用，是細(xì)胞凍存盒類(lèi)產(chǎn)品的經(jīng)典實(shí)驗(yàn)耗材之一。
程序降溫盒包括盒蓋、盒身和管槽，管槽置于盒身內(nèi)，盒蓋蓋于盒身上且與盒身螺紋配合，還包括連接帶，連接帶一端與盒蓋連接，另一端與盒身連接；本實(shí)用新型設(shè)置了連接盒蓋與盒身的連接帶，使盒蓋與盒身不分離，減少了配對(duì)標(biāo)記這一步驟，減少了操作程序，使用更加方便；同時(shí)，本實(shí)用新型出入超低溫冰箱時(shí)，可手提連接帶，減少了手的接觸面積，減少或防止凍傷；另外，管槽與盒身螺紋配合，增加了密封度，防止了異丙醇揮發(fā)而導(dǎo)致的凍存效果變差。
程序降溫盒使用經(jīng)驗(yàn)分享：
經(jīng)驗(yàn)1：我們實(shí)驗(yàn)室凍存盒平時(shí)放4度，需要凍細(xì)胞時(shí)直接拿出來(lái)用就可以了。第二天轉(zhuǎn)移至液氮，貴重的細(xì)胞盡快轉(zhuǎn)移，不然會(huì)影響復(fù)蘇成活率的。一般是用5次就更換一下異丙醇。現(xiàn)在也有一些商品化凍存液可以直接丟進(jìn)-80的，很方便，效果也不錯(cuò)的。
經(jīng)驗(yàn)2：異丙醇的量是要保證的，不能低于表明的線，否則不能起到很好的程序性降溫作用，我們是在4度放置，放了細(xì)胞后立馬放到-80度冰箱，第二天再轉(zhuǎn)移到液氮，效果很不錯(cuò)。異丙醇熔點(diǎn)：-87.9度的色透明具有乙醇?xì)馕兜目扇夹杂卸疽后w。注意了有可燃性！急性毒性：口服-大鼠LD50：5840毫克/公斤；口服-小鼠LC50：3600毫克/公斤。刺激數(shù)據(jù)：眼睛-兔子100毫克/！請(qǐng)注意清理！
經(jīng)驗(yàn)3：應(yīng)該不可以把凍存盒放4°的，因?yàn)樘荻冉禍氐钠鹗键c(diǎn)是室溫20°左右，所以從-80℃拿出來(lái)的凍存盒應(yīng)該現(xiàn)在室溫靜置一段時(shí)間待其恢復(fù)到室溫再使用。而其中的異丙醇應(yīng)使用6~7此后更換一次，而且保證液體量達(dá)到刻度線，否則降溫效果會(huì)受到影響。
經(jīng)驗(yàn)4：凍存盒里的異丙醇一般是250ml，低于刻度了要加上，理論上是5次以后更換異丙醇，但是異丙醇對(duì)環(huán)境有害，我們可以多用幾次，只是少了的時(shí)候要加滿。還有凍存液里面的DMSO對(duì)細(xì)胞有毒性，尤其是室溫的時(shí)候，所以?xún)龃婧泻蛢龃嬉合确?°，等把細(xì)胞用凍存液重懸好了放在凍存盒里，還放回4°，等到出細(xì)胞間的時(shí)候再拿到-80°里面保存。過(guò)夜再轉(zhuǎn)入液氮。
程序降溫盒這個(gè)梯度降溫可大大提高細(xì)胞凍存的存活率，由于程序降溫盒內(nèi)存在100%濃度的異丙醇和泡沫內(nèi)襯，因此程序降溫盒也可以用于細(xì)胞復(fù)蘇。
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