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硫氧還蛋白氧化還原酶（Thioredoxin Reductase, TrxR） 活性測定試劑盒

商品貨號：QS1110
英文名稱：Oxidized Thioredoxin Reductase (TrxR) Assay Kit
別名：硫氧還蛋白氧化還原酶試劑盒 TrxR Kit 硫氧還蛋白氧化還原酶（TrxR）試劑盒 硫氧還蛋白氧化還原酶（TrxR）測試盒
檢測方法：常量法

• 產(chǎn)品詳細(xì)介紹

測定意義：

TrxR是一種NADPH依賴的包含F(xiàn)AD結(jié)構(gòu)域的二聚體硒酶，屬于吡啶核苷酸-二硫化物氧化還原酶家族成員，與硫氧還蛋白以及NADPH共同構(gòu)成了硫氧還蛋白系統(tǒng)。TrxR與GR活性類似，催化GSSG還原生成GSH，是谷胱甘肽氧化還原循環(huán)關(guān)鍵酶之一。

測定原理：

TrxR催化NADPH還原DTNB生成TNB和NADP+，TNB在412 nm有特征吸收峰，通過測定412nm波長處TNB的增加速率，即可計算TrxR活性。

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• 產(chǎn)品說明書

貨號：QS1110                             規(guī)格：50 管/48 樣

 硫氧還蛋白氧化還原酶（thioredoxin reductase, TrxR） 活性測定試劑盒說明書

                             可見分光光度法

注意：正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義：

TrxR 是一種 NADPH 依賴的包含 FAD 結(jié)構(gòu)域的二聚體硒酶，屬于吡啶核苷酸-二硫化物氧化 還原酶家族成員，與硫氧還蛋白以及 NADPH 共同構(gòu)成了硫氧還蛋白系統(tǒng)。TrxR 與 GR 活性類似， 催化 GSSG 還原生成 GSH，是谷胱甘肽氧化還原循環(huán)關(guān)鍵酶之一。

測定原理：

TrxR 催化 NADPH 還原 DTNB 生成 TNB 和 NADP+，TNB 在 412 nm 有特征吸收峰，通過測定 412nm 波長處 TNB 的增加速率，即可計算 TrxR 活性。

自備實驗用品及儀器： 可見分光光度計、低溫離心機(jī)、可調(diào)節(jié)移液器、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水。

試劑組成和配制：

試劑一：液體 90mL×1 瓶，4℃保存。

試劑二：液體 5mL×1 瓶，4℃避光保存。

試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加入 5 mL 蒸餾水溶解。

粗酶液提取：

1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加 入 1mL 試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。8000g，4℃離心 10min，取上清置冰上待測。

2. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴個）：試劑一體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)胞加入 1mL 試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時 間 3min）；然后 8000g，4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測。

3. 血清等液體：直接測定。

TrxR 測定操作：

1. 分光光度計預(yù)熱 30 min，調(diào)節(jié)波長到 412nm，用蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑一在 25℃（一般物種）或者 37℃（哺乳動物）預(yù)熱 30min。

3. 測定管：取 1mL 玻璃比色皿，加入 100μ L 試劑二，100μ L 試劑三，700μ L 試劑一，100μ L 上清液，迅速混勻后于 412 nm 測定 10 s 和 310 s 吸光度，記為 A3 和 A4。△A 測定管=A2-A1。

TrxR 活性計算公式：

(1). 按蛋白濃度計算

活性單位定義：在 25℃或者 37℃中，每毫克蛋白每分鐘催化 1nmol DTNB 還原為 1 個酶活單位。

TrxR（nmol/min /mg prot）=△A 測定管÷ε ÷d×V 反總÷(Cpr×V 樣)÷T = 147×△A 測定管÷Cpr

(2). 按樣本質(zhì)量計算

活性單位定義：在 25℃或者 37℃中，每克樣本每分鐘催化 1nmol DTNB 還原為 1 個酶活單位。

TrxR（nmol/min /g 鮮重）=△A 測定管÷ε ÷d×V 反總÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T= 147×△A 測定管÷W

（3）按細(xì)胞數(shù)量計算

活性單位定義：在 25℃或者 37℃中，每 10⁴個細(xì)胞每分鐘催化 1nmol DTNB 還原為 1 個酶活單 位。

TrxR（nmol/min/104 cell）=△A 測定管÷ε ÷d×V 反總÷(細(xì)胞數(shù)量×V 樣÷V 樣總)÷T = 147×△A 測定管÷ 細(xì)胞數(shù)量

（4）按液體體積計算

活性單位定義：在 25℃或者 37℃中，每毫升液體每分鐘催化 1nmol DTNB 還原為 1 個酶活單位。

TrxR（nmol/min /mL）=△A 測定管÷ε ÷d×V 反總÷V 樣÷T = 147×△A 測定管

ε ：TNB 在 412nm 處的微摩爾消光系數(shù)，0.0136 L/μ mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V 反總： 反應(yīng)體系總體積（L），1000μ L=0.001 L；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度（mg/mL），需要另外測定； V 樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積（mL），100μ L=0.1 mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL；W， 樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間（min），5 min。

注意事項:

1. 測定前須先取 1～2 個樣做預(yù)實驗，哺乳動物組織及血液制品 TrxR 活力測定時，一般須用 蒸餾水稀釋 5 倍左右；測定過程操作須迅速。

2. 試劑二和試劑三配制好后 3 天內(nèi)使用完。

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